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In den 1950ern arbeitete er als Radiomoderator und bald darauf als Gastdarsteler in einigen TV-Serien, unter anderem "''Bonanza''" oder "''Twilight Zone''". Beim Casting zur Star Trek Serie ist [[Gene Roddenberry]] begeistert von Doohans schottischen Akzent und gab ihm die Rolle des Chefingenieurs.
Die nachhaltige Bekanntheit seiner Rolle war nicht nur positiv, er bekam wenig ernsthafte Filmangebote und kann so nur vergleichsweise wenige Gastollen Gastrollen und Filme aufweisen, von Star Trek abgesehen. Diese Lage verbesserte sich erst ab den 1980ern. Als Sprachtalent ist er aber auch häufig in Star Trek Produkten zu hören, so sprach er bei vielen Videospielen und natürlich bei der [[TAS|animierten Serie]] einige Rollen.
James Doohan war dreimal verheiratet, seine dritte Frau Wende ist bei der [[Hochzeit]] gerade erst 18, während Doohan 54 Jahre alt war. Am 11. April 2000 kam sein letztes und jüngstes Kind Sarah zur Welt. Im Oktober 2004 enthüllte er im Kreise weiterer Star Trek Darsteller seinen Stern auf dem "Hollywood Walk of Fame". Zu der Zeit war bereits bekannt, dass Doohan an Alzheimer leidet, daneben auch an Begleitkrankheiten wie Parkinson, Diabetes und Lungenfibrose. Nach 2004 hatte er sich aus der Öffentlichkeit zurückgezogen.
